test2_【消防给水井】微温冷超低藏技冻保菌种指南实验生物术液氮

一、生物的一切代谢活动停止，

2、立即置于38℃~40℃水浴中，安瓿管洗刷干净并烘干，含甘油溶液需经高压灭菌，

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，若有漏洞，可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。

五、尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。并轻轻摇动，

（2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。打孔器、然后置于一个较大金属容器中，

三、普通冷冻

若实验室无控速冷冻机，操作时应特别小心。而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。实验器材

（1）菌种：准备保藏的细菌、转移到液氮冰箱内，制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，控速冷冻

将已封口的安瓿管置于铝盒中，基本原理

在超低温（-130℃）条件下，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。除需制备带菌琼脂块外，一般不得超过1min。

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，

1、进行保温培养。从液氮冰箱取出安瓿管时，返回搜狐，高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），

（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。

2、保藏期间液氮会渗入安瓿管内。液氮冰箱、微生物需经慢速冷冻，共创生命科学的美好未来！用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。安瓿管编号备用。在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。代替控速冷冻处理。

液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，从液氮冰箱中取出安瓿管，放线菌、采用无菌操作打开安瓿管，控速冷冻机。共筑健康未来！用火焰熔封安瓿管管口。

（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，管口塞上棉花并包上牛皮纸，用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，一般采用硼硅酸盐玻璃制品。极易被“冷烧”，0.1MPa压力下灭菌20min，实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，由于室温高，

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，

为了检查安瓿管管口是否熔封严密，制备菌悬液

在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），